Tankoplastna kromatografija je metoda kemijske analize, ki temelji na uporabi sorbentne plasti z debelino 0,1-0,5 mm kot stacionarne faze. Metoda TLC se lahko uporablja na različnih področjih in omogoča določanje najrazličnejših kemičnih spojin.
Načelo metode
Metoda tankoslojne kromatografije se je rodila iz papirnate kromatografije, prvi poskusi pa so bili izvedeni v 80. letih 19. stoletja. Aktivna uporaba te analize se je začela šele po letu 1938.
TLC tehnika vključuje mobilno fazo (eluent), stacionarno fazo (sorbent) in analit. Stacionarna faza se nanese in pritrdi na posebno ploščo. Plošča je lahko iz stekla, aluminija ali plastike - to so podlage za večkratno uporabo, ki jih je treba po vsaki uporabi temeljito oprati, posušiti in pripraviti za nanašanje sorbenta. Možna je tudi uporaba papirnatih plošč, ki se po uporabi zavržejo.
Silikagel se najpogosteje uporablja kot stacionarna faza, vendar je mogoče uporabiti tudi druge sorbente, na primer aluminijev oksid. Pri uporabi tega ali onega sorbenta je treba strogo upoštevati tehnologijo, da bi bil rezultat na primer natančen, ker silikagel lahko da napačen rezultat, če je zrak v laboratoriju prevlažen.
Kot mobilna faza se uporabljajo topila, na primer voda, ocetna kislina, etanol, aceton, benzen. Pri izbiri topila je treba sprejeti odgovorno, saj je rezultat kromatografije neposredno odvisen od njegovih lastnosti (viskoznost, gostota, čistost). Za vsak analizirani vzorec je izbrano posamezno topilo.
Analiza
Vzorec je treba razredčiti v topilu. Če se popolno raztapljanje ne zgodi in ostane preveč nečistoč, lahko vzorec očistimo z ekstrakcijo.
Nanašanje vzorca na ploščo je mogoče samodejno ali ročno. Samodejni nanos uporablja metodo razprševanja, pri čemer se vsak vzorec razprši na ustrezno površino podlage. Za ročno nanašanje se uporablja mikropipeta. Oznake svinčnika se dajo na ploščo za vsak vzorec. Vsak vzorec s kapilarjem nanesemo na ploščo v eni vrstici na zadostni razdalji od oznak, da ne reagiramo z ogljikom iz svinca.
Plošča se namesti v posodo, na dno katere se vlije eluent. Nosilec se postavi z enim robom v posodo do označene črte. Posoda je tesno zaprta, da se prepreči izhlapevanje mobilne faze. Pod delovanjem kapilarnih sil se eluent začne dvigovati po sorbentni plasti. Ko eluent doseže določeno raven, ploščo odstranimo iz posode in posušimo.
Če želena snov nima barve, potem na substratu ne bo vidna. Zato se izvede vizualizacija - obdelava plošče z jodovimi hlapi ali drugimi barvili.
Po takšni obdelavi se oceni rezultat. Na sorbentu se pojavijo obarvana območja z različno intenzivnostjo. Za določitev snovi (ali skupine snovi) se obarvana območja, njihova velikost, intenzivnost in gibljivost primerjajo z referenčnim vzorcem.
Metoda TLC se pogosto uporablja, ker je hitra, poceni, natančna, intuitivna, ne zahteva zapletene opreme in je enostavna za razlago.
